細(xì)胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EVs)是指從細(xì)胞膜上脫落或者由細(xì)胞分泌的雙層膜結(jié)構(gòu)的囊泡狀小體,直徑從40nm到1000nm不等。胞外囊泡主要由微囊泡(Microvesicles, MVs)和外泌體(Exosomes, Exs)組成,微囊泡是細(xì)胞激活、損傷或凋亡后從細(xì)胞膜脫落的小囊泡,直徑約為100nm – 1000nm。
外泌體由細(xì)胞內(nèi)的多泡小體(multivesicular bodies)與細(xì)胞膜融合后以外分泌的形式釋放到細(xì)胞外,直徑約為40nm - 100nm。細(xì)胞外囊泡廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液(血液、淋巴液、唾液、尿液、jingye、乳汁)中,攜帶有細(xì)胞來(lái)源相關(guān)的多種蛋白質(zhì)、脂類、DNA、mRNA、miRNA等,參與細(xì)胞間通訊、細(xì)胞遷移、血管新生和免疫調(diào)節(jié)等過(guò)程。在糖尿病、心血管疾病、艾滋病、慢性炎癥疾病以及癌癥中都發(fā)現(xiàn)細(xì)胞外囊泡水平的升高,它們很有可能成為這類疾病的診斷標(biāo)志物,因此,對(duì)細(xì)胞外囊泡進(jìn)行準(zhǔn)確的定性和定量研究顯得尤為重要。
細(xì)胞外囊泡的檢測(cè)方法
目前細(xì)胞外囊泡(EVs)的檢測(cè)方法主要有掃描電子顯微鏡、原子力顯微鏡、動(dòng)態(tài)光散射技術(shù)、納米微粒追蹤分析術(shù)(NTA)、流式細(xì)胞儀和ELISA等,由于通量高、用時(shí)短、操作簡(jiǎn)單,ELISA和流式細(xì)胞儀是比較常用的方法。ELISA方法容易受其他可溶性抗原的干擾,而且無(wú)法知道囊泡的大小、數(shù)量等信息;流式細(xì)胞儀不僅可以檢測(cè)囊泡的大小、數(shù)量,而且通過(guò)細(xì)胞特異的標(biāo)記物染色可以檢測(cè)囊泡的來(lái)源,將囊泡進(jìn)行分類,因此,流式細(xì)胞儀理論上是進(jìn)行囊泡快速、高通量、多參數(shù)檢測(cè)的*選擇。然而,傳統(tǒng)流式細(xì)胞儀針對(duì)的樣本主要是細(xì)胞,散射光的檢測(cè)極限通常是300-500nm,而大多數(shù)細(xì)胞外囊泡的直徑都在300nm以下,由于無(wú)法與背景噪音區(qū)分,直徑小于300nm的細(xì)胞外囊泡很難被檢測(cè)到,因此,囊泡數(shù)量往往被低估,檢測(cè)結(jié)果自然也不準(zhǔn)確
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