信帆生物為大家分享:血液樣本在收集的時候有哪些小技巧
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
標(biāo)本的存放溫度及時間,血清、血漿及細(xì)胞分離的方法步驟也是分析前影響檢驗(yàn)結(jié)果的重要因素。抽血后,血細(xì)胞因代謝需要,要消耗掉部分營養(yǎng)成分,故對這些成分進(jìn)行測定時,需及時地離心以分離掉細(xì)胞成分。
采血前個體的準(zhǔn)備情況,如空腹時間的長短、采樣時間的確定及采血時患者的姿勢;止血帶應(yīng)用時間,輸液情況,體育運(yùn)動,抗凝劑及穩(wěn)定劑的選用;標(biāo)本的處理等均可影響到某些檢驗(yàn)指標(biāo)的水平。故標(biāo)本采集過程應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)化,以zui大限度地減少分析前誤差。
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一、不抗凝收集血清:
1、無添加劑的干燥空管收集:
血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的藥劑(硅油)。它利用血液自然凝固的原理使血液凝固,等血清自然析出后,離心使用。主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標(biāo)志物、血清免疫學(xué)檢測。
亦可直接用干燥EP管收集全血,充分靜置使得紅細(xì)胞充分自然凝固后,離心分離出血清待用或保存。
2、用促凝管收集:
采血管內(nèi)壁均勻涂有防止掛壁的硅油,同時添加了促凝劑。促凝劑能激活纖維蛋白酶,使可溶性纖維蛋白變成不可溶性的纖維蛋白聚體,進(jìn)而形成穩(wěn)定的纖維蛋白凝塊,如果想快點(diǎn)出結(jié)果時,可采用促凝管。一般靜置半小時到1小時,直接離心分離出血清待用或保存,常用于急診生化。
3、含有分離膠及促凝劑的采血管收集:
管壁經(jīng)過硅化處理,并涂有促凝劑可加速血液的凝固,縮短檢驗(yàn)時間。管內(nèi)加有分離膠,分離膠與PET管具有很好的親和性,確實(shí)起到隔離作用,一般即使在普通離心機(jī)上,分離膠能將血液中的液體成分(血清)和固體成分(血細(xì)胞)*分開并積聚在試管中形成屏障。離心后血清中不產(chǎn)生油滴,主要用于血清生化(肝功、腎功、心肌酶、淀粉酶等)、電解質(zhì)(血清鉀、鈉、氯、鈣、磷等)、甲狀腺功能、藥物檢測、艾滋病檢測、腫瘤標(biāo)志物、血清免疫學(xué)。
用促凝管的優(yōu)點(diǎn):
①、加速紅細(xì)胞的凝固,無需長時間的靜置;
②、帶有分離膠,有效的將血清分離出來,更好的避免溶血;
收集血清的缺點(diǎn):
①、需要紅細(xì)胞的充分凝固,所需靜置時間較長;
②、分離出的血清相對較少,1ml全血不抗凝約只能分離出0.2-0.3ml血清。
二、抗凝收集血漿:
收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接離心分離血漿待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及枸櫞酸鈉。
1、肝素抗凝:
zui常用的抗凝劑,一般情況下對相關(guān)指標(biāo)都不會有干擾,同時抗凝比例較大(抗凝劑:
全血=1:30),對血液基本沒有稀釋影響。
肝素是一種含有硫酸基團(tuán)的粘多糖,帶有強(qiáng)大的負(fù)電荷,具有加強(qiáng)抗III滅活絲
氨酸蛋白酶的作用,從而阻止的形成,并有阻止血小板聚集等多種抗凝作用。肝素管一般用于生化及血流變的檢測,是電解質(zhì)檢測的佳選擇,檢驗(yàn)血標(biāo)本中的鈉離子時,不能使用肝素鈉,以免影響檢測結(jié)果。也不能用于白細(xì)胞計(jì)數(shù)和分類,因肝素會引起白細(xì)胞聚集。
盡管用肝素的三種鹽抗凝所得電解質(zhì)濃度無顯著差別,但肝素鋰還是被認(rèn)為是的。這主要是人們認(rèn)為肝素鈉可使鈉的測定值偏高,肝素銨可使血氨測定值偏高(尿素酶法測定)。
肝素可抑制分子生物學(xué)中常用的一些工具酶,如限制性內(nèi)切酶、Taq酶等,可影響PCR
的實(shí)驗(yàn)結(jié)果??刹捎靡恍┓椒ㄏ嗡氐囊种菩?yīng),如利用肝素酶,或在分離白細(xì)胞后用緩沖液洗滌白細(xì)胞兩次以上等。然而,許多實(shí)驗(yàn)工作者仍不愿意在進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)時采用肝素作抗凝劑。
2、EDTA抗凝:
乙二胺四乙酸是一種氨基多羧基酸,可以有效地鰲合血液中的鈣離子,鰲合鈣會將鈣從
反應(yīng)點(diǎn)移走將阻止和終止內(nèi)源性或外源性凝血過程,從而防止血液凝固,與其他抗凝劑比較而言,其對血球的凝集及血細(xì)胞的形態(tài)影響較小,故通常使用EDTA鹽(2K、3K、2Na)作為抗凝劑。用于一般血液學(xué)檢查,不能用于血凝、微量元素及PCR檢查。
由于EDTA會螯合重金屬離子,用該抗凝劑的話,部分帶有金屬離子的大分子酶都會有大量損失,具體看客戶測定的指標(biāo)來選擇,做血常規(guī)的話必須用EDTA抗凝。
3、枸櫞酸鹽抗凝:
檸檬酸鈉通過作用于血樣中鈣離子鰲合而起抗凝作用,國家實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(NCCLS)推薦為3.2%或3.8%,抗凝劑與血比例為1:9,主要用于纖溶系統(tǒng)(原時間、時間、活化部分時間、纖維蛋白原)。采血時應(yīng)注意采足血量,以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,采血后應(yīng)立即輕輕顛倒混勻5-8次。由于抗凝比例較?。鼓齽喝?1:9),對血液有一定的稀釋,一般不建議。
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