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Poly(A)聚合酶使用原理
更新時間:2023-07-13   點擊次數(shù):736次

Poly(A)聚合酶使用原理


描述:本E. coli Poly(A) Polymerase 為高效加A 聚合酶,該酶以RNA為模板在RNA的3′末端加入20~200 個A堿基??蓱糜谠鰪妋RNA 的穩(wěn)定性,及microRNA 加A 尾,為cDNA 合成提供oligo-dT 引物結合位點等。該酶以單鏈RNA作為引物,ATP 作為底物進行聚合反應。




操作方法:
1. 按以下組分配制反應體系
E. coli Poly(A) Polymerase(5U/μl)    1 μl
10×EPAP Reaction Buffer    2 μl
10 mM ATP    2 μl
25 mM MnCl2    2 μl
RNA    0.5~10 μg
ddH2O    Up to 20 μl

2. 混合均勻后,37°C 反應1 小時。即可用于后續(xù)實驗。
注:不同的實驗需要加A 的量會有所不同,可通過減少反應時間來調整加A 的長度,該酶在37°C 反應30 分鐘時可加30 個A 堿基,1 小時可加100 個A 堿基。

活性定義:
在37℃、pH7.9 的條件下,以ATP 為底物,10 分鐘內把1 nmol 的AMP 聚合到RNA 上所需要的酶量定義為1 個活性單位(U)。


應用:
? RNA 3' 標記
? microRNA 加A 尾,為cDNA 合成提供oligo-dT 引物結
合位點
? 增強RNA 穩(wěn)定性
儲存:
-20°C 可保存2 年。


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